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酵母雙雜交

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酵母雙雜交

  • 所屬分類:常規分子生物學技術

  • 點擊次數:
  • 發布日期:2018/11/20
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詳細介紹

酵母雙雜交(Yeast two hybrid, Y2H)技術是利用酵母遺傳學方法分析蛋白質之間的相互作用,被廣泛應用於蛋白質組學、細胞信號轉導和功能基因組學等領域,已成為分子生物學研究領域的重要實驗手段。經過不斷的完善和發展,不但可以檢測已知蛋白質之間的相互作用,更重要的在於還可發現與已知蛋白相互作用的未知蛋白。

 

技術原理

轉錄活化蛋白可以和DNA上特異的序列結合而啟動相應基因的轉錄反應。這種DNA 結合與轉錄激活的功能是由轉錄活化蛋白上兩個相互獨立的結構域即DNA 結合結構域(Binding Domain, BD)和轉錄活化結構域(Activation Domain,AD)分別來完成的,並且這兩個結構域對於基因的轉錄活化都是必須的。目前酵母雙雜交實驗采用的係統有LexA係統和Gal4係統兩種。在LexA係統中,DNA結合結構域由一個完整的原核蛋白LexA構成,轉錄活化結構域則由一個88個氨基酸的酸性的大腸杆菌多肽B42構成,它在酵母中可以活化基因的轉錄; 在Gal4係統中,BD和AD分別由Gal4蛋白上不同的兩個結構域(1-147aa與768-881aa)構成。在利用GAL4係統篩選cDNA文庫或研究蛋白間的相互作用時,DNA結合結構域與靶蛋白即"誘餌"相結合,轉錄活化結構域與文庫蛋白或要驗證的蛋白相結合。一般情況下,單獨的BD可以與GAL4上遊活化序列(GALUAS)結合但不能引起轉錄,單獨的AD則不能與GALUAS結合,隻有當BD與AD分別表達的融合蛋白由於相互作用而導致兩者在空間上相互靠近時,BD與AD才能與GALUAS結合並且引起報道基因的轉錄。在BD與AD要導入的酵母菌AH109中,通過基因工程的方法在GAL4 UASs和啟動子的下遊構建了3個報道基因--ADE2,HIS3,MEL1(或LacZ),因此可以通過營養缺陷篩選和酵母菌表型的改變來篩選或驗證兩個蛋白之間是否存在相互作用。GAL4係統的原理如圖所示

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酵母雙雜交係統工作原理


技術流程

基因表達調控

 

樣品要求

1、新鮮組織材料、凍存材料;

2、高質量RNA、誘餌基因的模板。

3、盡可能詳盡的實驗相關信息。


本文網址:http://www.chinayuwo.com/product/568.html

關鍵詞:表觀組學技術服務,基因表達調控,基因表達定量

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